一、实验前准备工作：
1、培育瓶的包被：包被液如多聚赖氨酸或纤维粘连蛋白，以无菌水稀释至2 ug/cm2的浓度包被培育瓶。37度孵箱1小时或4度过夜，从包被好的培育瓶中收回多聚赖氨酸，并用无菌水洗刷培育瓶2遍。包被好的培育瓶不要放置超过24小时，其中的包被液可吸出重复使用2-3次，留意不要污染。
2、彻底培育基的配置：以内皮细胞培育基为例，把配套的胎牛血清、生长因子和双抗参加根底培育液中。重新贴好标签，并混匀培育基。
二、原代细胞复苏办法：
1、从液氮中取出原代细胞冷冻管，迅速投入37～38 ℃水浴中，其间能够悄悄滚动细胞，加速消融速度，大约需求1分钟时刻。
2、5分钟内用培育基稀释至原体积的10倍以上，参加培育瓶中，再用1ml培育基洗刷细胞冻存管，确保细胞都被参加培育瓶中，静置于孵箱，12-16小时后替换培育基（除去dmso）。今后每2天换一次液，确保细胞状况杰出。
三、原代细胞传dai办法：酶消化法
当细胞生长至70-80%左右能够传代，传代份额以1:2或1:3为佳。具体办法如下：
1、弃去培育瓶中培育基，用pbs洗刷培育瓶2遍，参加0.25%的胰酶消化液，以消化液能覆盖整个瓶底为准。37度孵育4分钟左右，轻拍培育瓶旁边面，显微镜下观察细胞消化状况，直到80%细胞呈现圆形。
2、细胞消化好后，参加胰酶中和液，并悄悄摇摆培育瓶，形成细胞悬液，然后将细胞和培育基转移至离心管中，1000rpm离心5分钟。
3、弃去上清液，以1-2ml新鲜培育基重新悬浮细胞并吹打均匀，接种于包被好的新培育瓶中，瓶中已有10ml左右的培育基，放入培育箱中培育，每2天替换培育基。

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